omniture

Blood!陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)再次發(fā)表高水平臨床研究論文

2022-05-08 08:00 9183

北京2022年5月8日 /美通社/ -- 2022年5月2日,陸道培醫(yī)院陸佩華教授(第一作者和共同通訊作者)團(tuán)隊(duì)、河北森朗生物科技有限公司(以下簡(jiǎn)稱"森朗")李建強(qiáng)教授(共同通訊作者)團(tuán)隊(duì)(劉瑩,共同第一作者)、北京大學(xué)人民醫(yī)院黃曉軍教授(共同通訊作者)合作在血液科國(guó)際權(quán)威期刊Blood(IF=23.63)發(fā)表了題為Naturally Selected CD7 CAR-T Therapy without Genetic Manipulations for T-ALL/LBL: First-in-human Phase I Clinical Trial 的研究論文。

急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL) 和T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤(T-cell lymphoblastic lymphoma, T-LBL)是具有高度侵襲性的T系惡性腫瘤。由于正常T細(xì)胞和惡性T細(xì)胞之間共有的抗原性,目前仍然缺乏針對(duì)T細(xì)胞惡性腫瘤的獲批CAR-T療法。

CD7在T-ALL/LBL T細(xì)胞表面高度表達(dá),是潛在的CAR-T治療靶點(diǎn)。靶向CD7的免疫療法可能會(huì)受到T細(xì)胞自相殘殺機(jī)制(fratricide)的影響。因此,在既往研究中曾采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)和蛋白沉默表達(dá)技術(shù)生產(chǎn)靶向CD7的CAR-T細(xì)胞。但是,基因編輯技術(shù)會(huì)使得CD7 CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)成本增加。此外,使用患者自體T細(xì)胞制造CD7 CAR-T細(xì)胞仍然具有一定難度。雖然供者來(lái)源或通用型CD7 CAR-T是一種選擇,但尋找合適的供體、異體CAR-T在體內(nèi)擴(kuò)增能力及持續(xù)時(shí)間等問(wèn)題仍有待解決。

針對(duì)上述難題,本研究開(kāi)展探索,使用了森朗生物研發(fā)的患者或供者來(lái)源的,無(wú)需額外進(jìn)行CD7基因編輯或蛋白質(zhì)表達(dá)阻斷的"自然選擇(Naturally Selected)"CD7 CAR-T細(xì)胞(NS7CAR)的新產(chǎn)品,并在1項(xiàng)針對(duì)T-ALL/LBL患者的1期臨床試驗(yàn)中首次探索了NS7CAR療法在人體內(nèi)的安全性和有效性。

臨床前研究

研究者使用三種不同的方法制造了靶向CD7的CAR-T細(xì)胞并比較它們的功能:1)NS7CAR:通過(guò)用7CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)總T細(xì)胞,然后對(duì)其進(jìn)行"自然選擇"的細(xì)胞培養(yǎng)方式獲得;2)Neg7CAR:由天然存在的CD7陰性T細(xì)胞(占CD3+T細(xì)胞的3%-10%)用7CAR進(jìn)行純化和轉(zhuǎn)導(dǎo)后進(jìn)行生產(chǎn);3)KO7CAR:通過(guò)將7CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)到使用CRISPR/Cas9RNP敲除CD7基因的總T細(xì)胞進(jìn)行制造。

在2周的培養(yǎng)期間內(nèi),NS7CAR的細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)顯著低于Neg7CAR和KO7CAR的擴(kuò)增倍數(shù);然而,有87.3%的NS7CAR是活細(xì)胞,使得進(jìn)一步研究成為可能。在收獲時(shí),NS7CAR組中平均92.4%的T細(xì)胞表達(dá)7CAR分子,顯著高于Neg7CAR或KO7CAR(p<0.0001)。在7CAR慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)三天后,NS7CAR組中的T細(xì)胞發(fā)生了從CD7+CAR-到CD7-CAR+的快速而顯著的表型轉(zhuǎn)變。

一個(gè)有趣的發(fā)現(xiàn)是,盡管NS7CAR組中的T細(xì)胞在體外培養(yǎng)后用流式未檢測(cè)到CD7的表面表達(dá),但使用RT-PCR和WesternBlot檢測(cè)到了顯著的CD7mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。與此同時(shí),在Neg7CAR或KO7CAR細(xì)胞中未觀察到CD7mRNA或蛋白質(zhì)表達(dá)。這些結(jié)果表明,盡管NS7CAR表達(dá)CD7mRNA和蛋白質(zhì),但它們?cè)诿庖邔W(xué)上是CD7陰性的,并由于CD7CAR的抗原隱蔽/細(xì)胞內(nèi)隔離作用而逃脫了自相殘殺的細(xì)胞殺傷機(jī)制。這一點(diǎn)在隨后的臨床研究中,在CAR-T回輸后第28天檢測(cè)到患者體內(nèi)NS7CAR中CD7mRNA的表達(dá)持續(xù)存在而被進(jìn)一步證實(shí)。此外,相比Neg7CAR和KO7CAR,NS7CAR包含較多的CD8+亞群和中央記憶表型亞群。

在體外抗白血病實(shí)驗(yàn)中,NS7CAR和KO7CAR對(duì)CCRF-CEM細(xì)胞均表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)募?xì)胞毒性,并釋放高水平的IFN-γ和TNF-α,但Neg7CAR細(xì)胞的相應(yīng)數(shù)值較低。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,在CAR-T注射后的前兩周內(nèi),NS7CAR和KO7CAR均可顯著降低小鼠模型中的白血病負(fù)擔(dān)。這些數(shù)據(jù)證明了無(wú)需額外的基因編輯,直接由7CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)的總T細(xì)胞產(chǎn)生有效的CD7CAR-T的可行性。因此,陸道培醫(yī)療團(tuán)隊(duì)在1期臨床試驗(yàn)中使用NS7CAR-T細(xì)胞,進(jìn)一步探索其有效性和安全性。


臨床研究

‖研究設(shè)計(jì)

本研究是1項(xiàng)開(kāi)放、單臂的1期臨床研究,目的是評(píng)估NS7CAR對(duì)CD7+R/R T-ALL或T-LBL患者的安全性和療效。入組標(biāo)準(zhǔn)包括年齡在2至65歲之間的患者,既往至少接受過(guò)兩線治療后失敗,且CD7表達(dá)≥80%的患者。在NS7CAR輸注后的第28天后,根據(jù)醫(yī)生的考量和患者的意愿,允許進(jìn)行鞏固性異體造血干細(xì)胞移植。

‖患者基線數(shù)據(jù)

此次臨床試驗(yàn),共入組和回輸20名復(fù)發(fā)或難治性(R/R) T-ALL/T-LBL患者,其中包含14名R/R T-ALL患者及6名R/R T-LBL患者。3名患者為Ph陽(yáng)性或ETP-ALL高危亞型;11名患者存在高危突變或基因融合。5名患者在入組前接受過(guò)移植?;颊呓邮芰酥形粩?shù)為4.5線的治療。入組時(shí),17名患者的骨髓腫瘤細(xì)胞比例中位數(shù)為21.49%;有3名T-LBL患者髓內(nèi)未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞。分別有5位T-LBL和4位T-ALL患者有髓外病灶,其中3名有中樞受累。

‖臨床產(chǎn)品制備及回輸

研究應(yīng)用了來(lái)源于患者或其移植供者的NS7CAR產(chǎn)品。對(duì)于未接受過(guò)異基因移植的患者,使用自體CAR-T細(xì)胞;對(duì)于入組時(shí)為移植后復(fù)發(fā)狀態(tài)的患者,在對(duì)患者進(jìn)行綜合評(píng)估后確定使用患者自體或移植供者來(lái)源的CAR-T細(xì)胞。所有患者的NS7CAR產(chǎn)品均成功制備(自體來(lái)源,n=18;供者來(lái)源,n=2),中位轉(zhuǎn)染效率為95.10%。NS7CAR產(chǎn)品有更多的CD8+亞群,中位CD4/CD8比例為0.42。在Day0,分別3、16和1名患者接受了低劑量(0.5×106/kg)、中劑量(1-1.5×106/kg)或高劑量(2×106/kg)的單次NS7CAR回輸。

‖療效及安全性

NS7CAR展現(xiàn)出了良好的安全性和耐受性。1名患者未出現(xiàn)CRS;18名患者的CRS≤2級(jí),僅有一名患者出現(xiàn)3級(jí)CRS。2名患者發(fā)生1級(jí)ICANS。

同時(shí),NS7CAR在臨床試驗(yàn)中展現(xiàn)了令人振奮的好療效。在Day28時(shí),16/17(94.12%)的骨髓受累患者實(shí)現(xiàn)了MRD陰性完全緩解;3名僅有髓外病灶的T-LBL患者也繼續(xù)保持了髓內(nèi)CRi的狀態(tài)。在9名有髓外病灶的患者中,5名在中位時(shí)間29天時(shí)達(dá)到髓外CR。兩名有巨大縱隔腫物(>7cm)的患者在第29天分別達(dá)到髓外部分緩解(PR)和疾病穩(wěn)定(SD),其中PR患者在第104天時(shí),其髓外病灶進(jìn)一步縮小。兩名有中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤(rùn)的患者也分別在第15天和第28天達(dá)到CR。

至研究截止日期(2021年10月25日),患者的中位隨訪時(shí)間為142.5天,最長(zhǎng)達(dá)311天。6/20名患者在CAR-T細(xì)胞回輸后未接受額外的抗白血病治療或移植,其中4人在54天的中位時(shí)間保持無(wú)疾病進(jìn)展。在回輸后中位時(shí)間57.5天,10名CR患者接受了鞏固性橋接移植;移植后中位隨訪時(shí)間為210天,7/10名CR患者在移植后保持MRD陰性并持續(xù)生存。兩名患者因個(gè)人原因出組,出組時(shí)均處于CR。一名患者進(jìn)行了二次移植,發(fā)展為3級(jí)aGvHD,隨后去世。有4名未達(dá)到CR或CR后復(fù)發(fā)的患者接受了挽救性移植并全部達(dá)到CR。


NS7CAR的細(xì)胞動(dòng)力學(xué)

NS7CAR擴(kuò)增起始于回輸后中位數(shù)4.5天。CAR中位峰值拷貝數(shù)為1.37×105copies/μg DNA,達(dá)到峰值的中位時(shí)間為19天。在末次隨訪時(shí),NS7CAR+DNA中位持續(xù)時(shí)間為90天;在移植后中位時(shí)間39.5天,12/14名患者仍可通過(guò)qPCR檢測(cè)到水平較低的NS7CAR+DNA。對(duì)于未橋接移植的6名患者,CAR-T細(xì)胞在末次隨訪中仍可檢測(cè)到,中位持續(xù)時(shí)間為48.5天。用流式檢測(cè)的NS7CAR中位峰值比例為67.76%,最高比例達(dá)84.71%;中位峰值時(shí)間為17天。

NS7CAR回輸后,患者外周血中惡性和正常CD7+細(xì)胞的最顯著減少發(fā)生在回輸后中位時(shí)間第7天。在CAR-T擴(kuò)增高峰,每位患者的T/B/NK細(xì)胞(不包括CAR+ 和白血病T細(xì)胞)的絕對(duì)數(shù)量均顯示出不同程度的短暫下降。NS7CAR迅速消滅了CD7+細(xì)胞,并主要保留了CD7陰性細(xì)胞亞群。T/B/NK細(xì)胞隨后恢復(fù)到基線水平,但就如所預(yù)期的,在移植后不久出現(xiàn)下降。在移植后,正常的CD7+T細(xì)胞和NK細(xì)胞得到充分恢復(fù)。


‖總結(jié)

該研究揭示了通過(guò)"自然選擇"機(jī)制生產(chǎn)靶向CD7 CAR-T細(xì)胞的方法(NS7CAR)。研究者發(fā)現(xiàn),雖然流式無(wú)法檢測(cè)到NS7CAR-T細(xì)胞表面上的CD7分子,但NS7CAR-T細(xì)胞繼續(xù)表達(dá)CD7mRNA和蛋白質(zhì)的水平雖然稍低,但與正常對(duì)照T細(xì)胞中的水平是可比的。研究認(rèn)為,NS7CAR-T細(xì)胞的CD7分子很可能被CD7CAR抗原掩蓋或在胞內(nèi)隔離,大大減少了NS7CAR-T的表面CD7抗原,避免了CAR-T細(xì)胞之間的大量自相殘殺。不能排除在體外"自然選擇"過(guò)程中,少部分NS7CAR-T細(xì)胞從自相殘殺中出現(xiàn)的可能性。這使得NS7CAR-T與真正的CD7陰性的Neg7CAR-T或KO7CAR-T細(xì)胞形成對(duì)比。研究者提出,許多NS7CAR-T細(xì)胞本身并不是CD7陰性,而是功能性CD7陰性。

因此,研究者提出假設(shè):由于CAR信號(hào)可能需要蛋白質(zhì)復(fù)合物形成,CAR-T細(xì)胞通過(guò)NS7CAR-T細(xì)胞表面的游離CD7CAR與靶向T細(xì)胞上表達(dá)的CD7之間的相互作用被激活,而胞內(nèi)CD7-CD7CAR復(fù)合物不能激活T細(xì)胞。與Neg7CAR和KO7CAR細(xì)胞相比,細(xì)胞內(nèi)CD7CAR-CD7相互作用是否導(dǎo)致CAR信號(hào)減弱,并導(dǎo)致NS7CAR細(xì)胞體外擴(kuò)增程度降低仍待確定。其次,自相殘殺是否在NS7CAR減少擴(kuò)增中發(fā)揮了作用還有待進(jìn)一步研究。

在NS7CAR中,存在顯著更多的CD8+中央記憶CAR-T細(xì)胞,這種CD8偏向性可能提供更持久的疾病控制。由于NS7CAR的產(chǎn)生不涉及額外的基因編輯,避免了脫靶效應(yīng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此,NS7CAR的生物學(xué)特性和其生產(chǎn)的便捷十分有利于其臨床應(yīng)用。

迄今為止,針對(duì)T細(xì)胞惡性血液腫瘤的靶向CD7 的CAR-T療法僅有有限的臨床試驗(yàn)和病例報(bào)告。NS7CAR可由患者或供者的外周血制備,中位轉(zhuǎn)染率大于95%,且細(xì)胞活性率約90%。由T系惡性血液腫瘤患者制備的自體CAR-T細(xì)胞的主要安全顧慮是細(xì)胞終產(chǎn)品中的惡性細(xì)胞污染。根據(jù)每個(gè)患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞的表型,使用CD3或CD4/CD8選擇加上NS7CAR的體外 "自然選擇 "以及強(qiáng)大的抗白血病活性,可以成功地排除NS7CAR制備中的惡性細(xì)胞。

在該臨床試驗(yàn)中,幾乎所有患者在第28天時(shí)都達(dá)到了MRD陰性的CR。大部分有髓外病灶的患者,包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者或彌漫性髓外受累的患者,也都能達(dá)到髓外CR。兩名有巨大縱膈腫塊的患者分別達(dá)到了PR和SD。對(duì)于有巨大腫塊的患者來(lái)說(shuō),可能需要更長(zhǎng)的時(shí)間及聯(lián)合治療來(lái)實(shí)現(xiàn)CR,因?yàn)楦鶕?jù)PET-CT評(píng)估,處于PR的患者在第104天發(fā)現(xiàn)有進(jìn)一步的臨床改善。

入組該臨床試驗(yàn)的患者曾接受了大量的既往治療。鑒于CD19 CAR-T治療的B-ALL患者復(fù)發(fā)率較高,而且T-ALL/LBL比一般B-ALL更具侵略性,該研究允許在緩解后進(jìn)行鞏固性異基因造血干細(xì)胞移植。共有10名骨髓和髓外CR患者進(jìn)行了鞏固性異基因造血干細(xì)胞移植,這可能限制對(duì)于NS7CAR-T單藥治療的持續(xù)性的評(píng)估。盡管如此,在中位隨訪時(shí)間超過(guò)4.5個(gè)月(最長(zhǎng)10個(gè)月)的情況下,NS7CAR回輸后再進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植組沒(méi)有觀察到復(fù)發(fā)現(xiàn)象。在6名沒(méi)有接受移植的CR患者中,有4名在最后一次隨訪時(shí)仍保持CR(中位時(shí)間1.5個(gè)月,最長(zhǎng)6個(gè)月)。然而,在一些未達(dá)到CR或復(fù)發(fā)的患者中,觀察到CD7靶點(diǎn)丟失。

STIL-TAL1融合基因與較高的復(fù)發(fā)率和較差的預(yù)后有關(guān),發(fā)生在高達(dá)約25%的T-ALL患者中。在這一研究中,所有3名STIL-TAL1融合基因的患者預(yù)后都較差,有1名NR和2名早期復(fù)發(fā),表明單獨(dú)使用CAR-T療法可能無(wú)法扭轉(zhuǎn)其臨床結(jié)局。一旦這類患者從CAR-T中獲得CR,應(yīng)在治療過(guò)程的早期考慮進(jìn)行移植。

NS7CAR-T細(xì)胞的擴(kuò)增在中位第19天達(dá)到峰值,截至最后一次隨訪時(shí),可檢測(cè)到NS7CAR-T細(xì)胞持續(xù)存在長(zhǎng)達(dá)195天。12/14名患者在移植后中位隨訪時(shí)間1.2個(gè)月(最長(zhǎng)4.9個(gè)月)時(shí),仍可通過(guò)qPCR檢測(cè)到低水平的NS7CAR-T。

NS7CAR表現(xiàn)出卓越的安全性,在大多數(shù)患者中只有輕微的CRS,沒(méi)有嚴(yán)重的神經(jīng)毒性。在該臨床研究方案中,早期應(yīng)用托珠單抗干預(yù)管理,有可能降低嚴(yán)重CRS的發(fā)生。這種早期干預(yù)和管理可能在減少CRS方面發(fā)揮了作用。

兩名曾有異基因造血干細(xì)胞移植史的患者在回輸時(shí)使用了來(lái)自移植供者的CAR-T細(xì)胞,其中一位出現(xiàn)了輕微的皮膚排異反應(yīng)。因此,應(yīng)特別關(guān)注此類患者。14名患者中有7名接受了后續(xù)的異基因造血干細(xì)胞移植,包括其中2名第二次移植的患者出現(xiàn)了GvHD。雖然在這7名回輸后出現(xiàn)GvHD的患者中仍可檢測(cè)到極低水平的CAR-T細(xì)胞,但是不太可能是導(dǎo)致GvHD的原因。

小結(jié)

在該研究中,NS7CAR在體外和體內(nèi)均表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤作用。NS7CAR的首次人體臨床試驗(yàn)表明,無(wú)需額外的基因編輯即可防止CD7表達(dá),并成功生產(chǎn)NS7CAR-T細(xì)胞??傮w而言,NS7CAR對(duì)治療R/R T-ALL/LBL是安全且高效的。

消息來(lái)源:陸道培醫(yī)療集團(tuán)
China-PRNewsire-300-300.png
醫(yī)藥健聞
微信公眾號(hào)“醫(yī)藥健聞”發(fā)布全球制藥、醫(yī)療、大健康企業(yè)最新的經(jīng)營(yíng)動(dòng)態(tài)。掃描二維碼,立即訂閱!
collection